重組糖苷酶PNGaseF
- 別名：N-糖酰胺酶F；N-糖苷酶F
- 編碼：ECE0441E
- 級(jí)別：
- 簡(jiǎn)介：PNGase F是一種酰胺酶，切割糖蛋白上的N-連接糖，切割的糖型有：高甘露糖、雜合和復(fù)雜寡糖，切割位點(diǎn)為：內(nèi)側(cè)的N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）和天冬酰胺之間。應(yīng)用于抗體和糖蛋白的N-糖基全部去除。
基礎(chǔ)信息
| CAS | 83534-39-8 |
| 來源 | 伊麗莎白菌 E.coli重組表達(dá) |
| 純度 | >95% |
| 酶存儲(chǔ)緩沖液 | 20mM Tris-HCl,100mM NaCl,5mM EDTA,50%Glycerol,pH=7.7 |
| 組成成分 | PNGase F；10×變性緩沖液；10×糖苷酶緩沖液；10%NP-40 |
| 存儲(chǔ)溫度 | -20℃ |
| 有效期 | 12個(gè)月 |
| 應(yīng)用 | 抗體和糖蛋白的N-糖基全部去除 |
產(chǎn)品介紹
【產(chǎn)品描述】
PNGase F是一種酰胺酶，切割糖蛋白上的N-連接糖，切割的糖型有：高甘露糖、雜合和復(fù)雜寡糖，切割位點(diǎn)為：內(nèi)側(cè)的N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）和天冬酰胺之間。使得糖蛋白釋放以天冬酰胺連接的糖分子，并使得天冬酰胺轉(zhuǎn)化為天冬氨酸本公司PNGase是E.coli重組表達(dá)，并經(jīng)多步純化制備的重組蛋白。可以提供不含甘油形式，便于在HPLC方法中取得較佳作用。
【酶活定義】
一個(gè)單位是指10μL的反應(yīng)體系中，37°℃反應(yīng)1小時(shí)從10μg變性RNase B中除去超過95%的碳水化合物所需要的酶量。
【組成成分】
組分 | 規(guī)格1 | 規(guī)格2 |
PNGase F | 20KU | 40KU |
10×變性緩沖液 | 200uL | 200uL |
10×糖苷酶切緩沖液 | 200uL | 200uL |
10% NP-40 | 200uL | 200uL |
【使用方法 僅供參考】
變性酶切
1、用去離子水溶解1-20μg糖蛋白，加入1μl10×變性緩沖液，并用去離子水定溶至10μl。100℃孵育10 min。
轉(zhuǎn)移至冰上，并離心10s。
2、 加入2μl 10×糖苷酶切緩沖液，2μl 10%NP-40,5μl去離子水，混勻。
3、加入1μl PNGase F，37°℃孵育60 min，進(jìn)行SDS-PAGE或HPLC分析。
非變性酶切
1、用去離子水溶解1-20μg糖蛋白，加入1μl10×糖苷酶切緩沖液，2-4μl PNGase F，并用去離子水定溶至10μl，
37℃孵育2h-過夜。
2、進(jìn)行SDS-PAGE或HPLC分析。
【注意事項(xiàng)】
本品復(fù)溶后盡量避免反復(fù)凍融；
變性酶切的效率較高，應(yīng)先進(jìn)行嘗試。如果遇到無法進(jìn)行變性酶切(例如變性過程中出現(xiàn)沉淀),可嘗試非變性酶切，但酶切效率可能會(huì)下降，建議增加酶量并延長酶切時(shí)間。
使用時(shí)請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套；
質(zhì)量指標(biāo)
MSDS
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