1. 項目背景
凝血酶的生成是凝血途徑的核心，它催化纖維蛋白原轉化為纖維蛋白形成血栓。由于它在體內的半衰期極短，只有幾秒鐘，因此測定困難。血漿凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）在纖維蛋白聚合物形成過程中產生，是凝血酶生成后與抗凝血酶1:1結合形成的復合物，在血漿的半衰期約3-15分鐘，可間接反映凝血酶的生成量，是凝血系統啟動的標志，可直接、靈敏地反映凝血系統的活化程度，并進一步早期預測血栓的形成和再栓的復發。同時，TAT也是抗凝治療的敏感指標，TAT水平升高提示凝血酶合成增加、凝血功能亢進，機體處于高凝狀態。
日本血栓止血學會的學術標準化委員會《纖溶優勢型DIC的病態診斷指南（2006年）》中，將“TAT≥20μg/L且PIC≥10μg/mL”作為診斷必要條件。即使是血小板計數＜120×109μg/mL的感染性疾病患者（仍存在血小板消耗性減少），如TAT＜7ng/mL，提示發生DIC風險較低。TAT對于感染性疾病患者的DIC趨勢預測，是一種陰性預測值較高的標志物。下圖是TAT的作用機制。
2. 性能表現
針對血漿凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）的檢測，西寶生物推出4種單克隆抗體及1種抗原。具體性能如下（以下評估僅代表在西寶生物的工藝體系下的驗證，建議客戶根據自身工藝進行更為詳細的驗證）
2.1化學發光（AE）平臺
組合1：凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號：EKY0964B）包被羧基磁珠+凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號:EKY0965B）標記吖啶酯；
線性范圍：0.4 ng/mL-120 ng/mL；最低檢出限：0.4 ng/mL。
2.2化學發光（AP）平臺
組合1：凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號：EKY0964C）包被羧基磁珠+凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號:EKY0965C）標記堿性磷酸酶（DCE0108L）；
線性范圍：0.4 ng/mL-120 ng/mL；最低檢出限：0.4 ng/mL。
2.3 穩定性評估
2.3.1 磁珠包被抗體穩定性
采用磁珠標記物稀釋液（貨號：DCD0532A）將凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號：EKY0964C）包被羧基磁珠濃縮液稀釋成磁珠工作液，進行37℃熱穩定性實驗。如表1所示：
TAT磁珠工作液單獨37℃熱加速7天與2℃-8℃儲存7天發光值平均變化在±10%以內（不含S0），表明TAT磁珠工作液熱穩定性良好。
表1 TAT磁珠工作液穩定性7天數據
序號 | TAT抗原稀釋 濃度ng/mL | TAT 磁珠工作液37℃ 熱加速7天與2℃ -8℃儲存7天發光值均值差異 |
S0 | 0 | -0.2% |
S1 | 2 | -5.4% |
S2 | 6.91 | -5.4% |
S3 | 16.88 | -10.7% |
S4 | 40.73 | -5.2% |
S5 | 70.95 | -7.6% |
平均變化（不含S0） | -6.9% | |
2.3.2 堿性磷酸酶標記抗體及磁珠包被抗體穩定性
采用堿性磷酸酶（ALP）標記物稀釋液（貨號：DCD0533A）+5%左右的蛋白保護劑GH（貨號：DCL0009A）配成新的AP酶稀釋液，將凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號:EKY0965C）標記堿性磷酸酶濃縮液稀釋成堿性磷酸酶工作液，進行37℃熱穩定性實驗。如表2所示：
堿性磷酸酶工作液單獨37℃熱加速7天與2℃-8℃儲存7天發光值平均變化在±5%以內（不含S0），表明TAT堿性磷酸酶工作液熱穩定性良好。
表2 TAT堿性磷酸酶工作液穩定性7天數據
序號 | TAT抗原稀釋 濃度ng/mL | TAT 堿性磷酸酶工作液37℃ 熱加速7天與2℃ -8℃儲存7天發光值均值差異 |
S0 | 0 | -1.4% |
S1 | 2 | -0.9% |
S2 | 6.91 | 3.2% |
S3 | 16.88 | 9.3% |
S4 | 40.73 | 1.7% |
S5 | 70.95 | 3.3% |
平均變化（不含S0） | 3.3% | |
3. 臨床相關性
3.1化學發光（AE）平臺
西寶TAT抗體配對組合1（＜20 ng/mL）的發光值與希森美康 TAT發光試劑賦值臨床相關性R2在0.94左右。
西寶TAT抗體配對組合1（＜120 ng/mL）的發光值與希森美康 TAT發光試劑賦值臨床相關性R2在0.95左右。
3.2化學發光（AP）平臺
西寶TAT抗體配對組合2（＜20 ng/mL）的發光值與希森美康 TAT發光試劑賦值臨床相關性R2在0.88左右。
西寶TAT抗體配對組合2（＜120 ng/mL）的發光值與希森美康 TAT發光試劑賦值臨床相關性R2在0.95左右。
西寶TAT抗體配對組合2（＜120 ng/mL）的發光值與廣州萬孚 TAT發光試劑賦值臨床相關性R2＞0.95。
4. 測試方案
4.1化學發光（AE）平臺抗體配對組合1
樣本/校準品:加樣量20ul；
試劑1：凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號:EKY0964B）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；
試劑2：凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號:EKY0965B）標記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測試；
反應條件：
第一步：20ul樣品+50ul試劑1，37℃孵育9min，清洗；
第二步：加入50ul試劑2，37℃孵育9min，清洗；
第三步：加入預激發液及激發液，進行測試。
測試使用發光儀器:科斯邁SMART 500S。
4.2化學發光（AP）平臺抗體配對組合2
待測抗原：凝血酶-抗凝血酶復合物抗原（貨號：EDD0797B）
樣本/校準品:加樣量10ul；
試劑1：凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號:EKY0964C）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；
試劑2：凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號:EKY0965C）標記-堿性磷酸酶稀釋物，用量50ul/測試；
反應條件：
第一步：10ul樣品+50ul試劑1，37℃孵育10min，清洗；
第二步：加入50ul試劑2，37℃孵育10min，清洗；
第三步：加入底物，進行測試。
測試使用發光儀器:迎凱Shine i2900。
5.產品信息
產品名稱 | 貨號 | 推薦配對 |
凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體 | EKY0964B | 凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號：EKY0964B）包被羧基磁珠+凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號：EKY0965B）標記吖啶酯（發光配對組合1） |
凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體 | EKY0965B | |
凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體 | EKY0964C | 凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體3（貨號：EKY0964C）包被羧基磁珠+凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體4（貨號：EKY0965C）標記堿性磷酸酶（發光配對組合2） |
凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體 | EKY0965C | |
凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號：EKY0964B）-羧基磁珠濃縮液 | DKY1327A | |
DKY1327B | ||
凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號：EKY0964C）-羧基磁珠濃縮液 | DKY1327C | |
凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號：EKY0965C）-堿性磷酸酶濃縮液 | DKY1327D | |
凝血酶-抗凝血酶復合物抗原 | EDD0797B | |
羧基磁性微球，1.5um | DEG0800C | |
AMPPD 發光底物液（即用型） | DCD0517B | |
蛋白保護劑GH | DCL0009A | 推薦使用濃度5%左右 |
重組堿性磷酸酶（高活性） | DCE0108L | |
磁珠標記物稀釋液（化學發光） | DCD0532A | / |
堿性磷酸酶（ALP）標記物稀釋液（化學發光） | DCD0533A | / |
1. 項目背景
凝血酶的生成是凝血途徑的核心，它催化纖維蛋白原轉化為纖維蛋白形成血栓。由于它在體內的半衰期極短，只有幾秒鐘，因此測定困難。血漿凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）在纖維蛋白聚合物形成過程中產生，是凝血酶生成后與抗凝血酶1:1結合形成的復合物，在血漿的半衰期約3-15分鐘，可間接反映凝血酶的生成量，是凝血系統啟動的標志，可直接、靈敏地反映凝血系統的活化程度，并進一步早期預測血栓的形成和再栓的復發。同時，TAT也是抗凝治療的敏感指標，TAT水平升高提示凝血酶合成增加、凝血功能亢進，機體處于高凝狀態。
日本血栓止血學會的學術標準化委員會《纖溶優勢型DIC的病態診斷指南（2006年）》中，將“TAT≥20μg/L且PIC≥10μg/mL”作為診斷必要條件。即使是血小板計數＜120×109μg/mL的感染性疾病患者（仍存在血小板消耗性減少），如TAT＜7ng/mL，提示發生DIC風險較低。TAT對于感染性疾病患者的DIC趨勢預測，是一種陰性預測值較高的標志物。下圖是TAT的作用機制。
2. 性能表現
針對血漿凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）的檢測，西寶生物推出4種單克隆抗體及1種抗原。具體性能如下（以下評估僅代表在西寶生物的工藝體系下的驗證，建議客戶根據自身工藝進行更為詳細的驗證）
2.1化學發光（AE）平臺
組合1：凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號：EKY0964B）包被羧基磁珠+凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號:EKY0965B）標記吖啶酯；
線性范圍：0.4 ng/mL-120 ng/mL；最低檢出限：0.4 ng/mL。
2.2化學發光（AP）平臺
組合1：凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號：EKY0964C）包被羧基磁珠+凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號:EKY0965C）標記堿性磷酸酶（DCE0108L）；
線性范圍：0.4 ng/mL-120 ng/mL；最低檢出限：0.4 ng/mL。
2.3 穩定性評估
2.3.1 磁珠包被抗體穩定性
采用磁珠標記物稀釋液（貨號：DCD0532A）將凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號：EKY0964C）包被羧基磁珠濃縮液稀釋成磁珠工作液，進行37℃熱穩定性實驗。如表1所示：
TAT磁珠工作液單獨37℃熱加速7天與2℃-8℃儲存7天發光值平均變化在±10%以內（不含S0），表明TAT磁珠工作液熱穩定性良好。
表1 TAT磁珠工作液穩定性7天數據
序號 | TAT抗原稀釋 濃度ng/mL | TAT 磁珠工作液37℃ 熱加速7天與2℃ -8℃儲存7天發光值均值差異 |
S0 | 0 | -0.2% |
S1 | 2 | -5.4% |
S2 | 6.91 | -5.4% |
S3 | 16.88 | -10.7% |
S4 | 40.73 | -5.2% |
S5 | 70.95 | -7.6% |
平均變化（不含S0） | -6.9% | |
2.3.2 堿性磷酸酶標記抗體及磁珠包被抗體穩定性
采用堿性磷酸酶（ALP）標記物稀釋液（貨號：DCD0533A）+5%左右的蛋白保護劑GH（貨號：DCL0009A）配成新的AP酶稀釋液，將凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號:EKY0965C）標記堿性磷酸酶濃縮液稀釋成堿性磷酸酶工作液，進行37℃熱穩定性實驗。如表2所示：
堿性磷酸酶工作液單獨37℃熱加速7天與2℃-8℃儲存7天發光值平均變化在±5%以內（不含S0），表明TAT堿性磷酸酶工作液熱穩定性良好。
表2 TAT堿性磷酸酶工作液穩定性7天數據
序號 | TAT抗原稀釋 濃度ng/mL | TAT 堿性磷酸酶工作液37℃ 熱加速7天與2℃ -8℃儲存7天發光值均值差異 |
S0 | 0 | -1.4% |
S1 | 2 | -0.9% |
S2 | 6.91 | 3.2% |
S3 | 16.88 | 9.3% |
S4 | 40.73 | 1.7% |
S5 | 70.95 | 3.3% |
平均變化（不含S0） | 3.3% | |
3. 臨床相關性
3.1化學發光（AE）平臺
西寶TAT抗體配對組合1（＜20 ng/mL）的發光值與希森美康 TAT發光試劑賦值臨床相關性R2在0.94左右。
西寶TAT抗體配對組合1（＜120 ng/mL）的發光值與希森美康 TAT發光試劑賦值臨床相關性R2在0.95左右。
3.2化學發光（AP）平臺
西寶TAT抗體配對組合2（＜20 ng/mL）的發光值與希森美康 TAT發光試劑賦值臨床相關性R2在0.88左右。
西寶TAT抗體配對組合2（＜120 ng/mL）的發光值與希森美康 TAT發光試劑賦值臨床相關性R2在0.95左右。
西寶TAT抗體配對組合2（＜120 ng/mL）的發光值與廣州萬孚 TAT發光試劑賦值臨床相關性R2＞0.95。
4. 測試方案
4.1化學發光（AE）平臺抗體配對組合1
樣本/校準品:加樣量20ul；
試劑1：凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號:EKY0964B）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；
試劑2：凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號:EKY0965B）標記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測試；
反應條件：
第一步：20ul樣品+50ul試劑1，37℃孵育9min，清洗；
第二步：加入50ul試劑2，37℃孵育9min，清洗；
第三步：加入預激發液及激發液，進行測試。
測試使用發光儀器:科斯邁SMART 500S。
4.2化學發光（AP）平臺抗體配對組合2
待測抗原：凝血酶-抗凝血酶復合物抗原（貨號：EDD0797B）
樣本/校準品:加樣量10ul；
試劑1：凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號:EKY0964C）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；
試劑2：凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號:EKY0965C）標記-堿性磷酸酶稀釋物，用量50ul/測試；
反應條件：
第一步：10ul樣品+50ul試劑1，37℃孵育10min，清洗；
第二步：加入50ul試劑2，37℃孵育10min，清洗；
第三步：加入底物，進行測試。
測試使用發光儀器:迎凱Shine i2900。
5.產品信息
產品名稱 | 貨號 | 推薦配對 |
凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體 | EKY0964B | 凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號：EKY0964B）包被羧基磁珠+凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號：EKY0965B）標記吖啶酯（發光配對組合1） |
凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體 | EKY0965B | |
凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體 | EKY0964C | 凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體3（貨號：EKY0964C）包被羧基磁珠+凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體4（貨號：EKY0965C）標記堿性磷酸酶（發光配對組合2） |
凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體 | EKY0965C | |
凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號：EKY0964B）-羧基磁珠濃縮液 | DKY1327A | |
DKY1327B | ||
凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號：EKY0964C）-羧基磁珠濃縮液 | DKY1327C | |
凝血酶-抗凝血酶復合物（TAT）抗體（貨號：EKY0965C）-堿性磷酸酶濃縮液 | DKY1327D | |
凝血酶-抗凝血酶復合物抗原 | EDD0797B | |
羧基磁性微球，1.5um | DEG0800C | |
AMPPD 發光底物液（即用型） | DCD0517B | |
蛋白保護劑GH | DCL0009A | 推薦使用濃度5%左右 |
重組堿性磷酸酶（高活性） | DCE0108L | |
磁珠標記物稀釋液（化學發光） | DCD0532A | / |
堿性磷酸酶（ALP）標記物稀釋液（化學發光） | DCD0533A | / |
