【包裝規格】

【檢測原理和用途】

硫酸皮膚素（Dermatan sulfate，DS）屬于糖胺聚糖類，亦稱作硫酸軟骨素B，其結構由β-艾杜糖醛酸-(1-3)-N-乙酰基-β-半乳糖胺-4硫酸的重復二糖單元構成。DS分子具有顯著的負電荷特性，易于與蛋白質發生共價鍵結合，形成蛋白聚糖。在生物體內，DS廣泛存在于細胞外基質和血管壁中，發揮著細胞黏附、信號傳導、抗凝血以及血管保護等生理功能和藥理作用。硫酸皮膚素已被應用于治療骨關節炎和心血管疾病。在化妝品領域，DS被用于保濕、抗衰老以及改善皮膚健康。此外，DS在飲食補充劑中亦有應用。本試劑盒利用硫酸皮膚素的特異性降解酶，將DS分解為不飽和糖醛酸，并在232nm波長處產生特異性光吸收，通過標準曲線法可實現對樣本中DS含量的精確測定。

【使用說明】

一、工前準備

1.設備準備

請事先準備好酶標儀、移液器、無菌離心管、溫箱等。

2.標準品工作液制備

取一支標準品，準確加入1000μL稀釋液，混合均勻后形成500μg/ml的DS溶液，隨后通過倍比稀釋方法，制備獲得250μg/ml、125μg/ml、62.5μg/ml、31.3μg/ml、15.6μg/ml、7.8μg/ml的標準品溶液，各500μl。

3.酶工作液制備

取酶，加入500μl稀釋液，輕輕混勻，室溫溶解10min，形成4×母液。-20℃可穩定保存6個月。

使用時，將4×母液用稀釋液稀釋4倍，形成酶工作液。

4.樣品制備

用稀釋液溶解或稀釋樣品，必要時可通過離心和/或0.22μm過濾處理后獲得上清用于后續檢測，避免有不溶性物質存在。調整樣品中的DS濃度至7~250 μg/mL范圍內。

二、檢測步驟

1.預熱

將稀釋液和配制好的底物液于37℃保溫5min。酶標儀開機預熱30min，調節檢測波長至232 nm。

2.標準曲線繪制

（1）標記好標準品的孔位，每個標準品孔設置2重復，在標準品孔內加入酶工作液，50μl/孔。

（2）分別取各濃度的標準品工作液，加入對應標記好的UV酶標板孔內，200μl/孔。

（3）立即讀取OD₂₃₂數值，記為OD_T0值。

（4）于37℃恒溫孵育30min。

（5）讀取第30min時的OD₂₃₂數值，記為OD_T1值。

以標準品濃度為x軸，對應?OD（OD_T1-OD_T0）值為y軸，繪制標準曲線，R²≥0.9900。

3.樣品測定

（1）UV酶標板上標記好樣品孔和溶劑對照孔。

（2）在樣品孔和對照孔內加入酶工作液，50μl/孔。

（3）分別取200μl樣品和溶劑，加入樣品孔和溶劑對照孔內，200 μl/孔。

（4）立即讀取OD232數值，記為ODT0值。

（5）于37℃恒溫孵育30min。

（6）讀取第30min時的OD232數值，記為ODT1值。

（7）計算?OD（ODT1-ODT0）值，根據標準曲線和樣品稀釋倍數計算樣品中硫酸皮膚素的含量。

三、結果計算

Xi=d*(?OD-b)/a

式中：

Xi —— 樣品中的DS濃度（μg/ml）；

d—— 樣品稀釋倍數；

?OD——0min和30min的OD232差值；

a —— 標準方程式中的斜率a；

b —— 標準方程式中的截距b。