體外轉(zhuǎn)錄獲得的mRNA未經(jīng)細(xì)胞內(nèi)一系列修飾，不具備Cap 結(jié)構(gòu)與PolyA 尾，容易降解，易激活免疫反應(yīng)，不能與核糖體起始蛋白結(jié)合，沒辦法啟動(dòng)蛋白翻譯，因而在工業(yè)化mRNA生產(chǎn)中，需使用牛痘病毒加帽酶對IVT 的mRNA進(jìn)行加帽修飾，使mRNA的5' 端獲得Cap0 結(jié)構(gòu)，進(jìn)一步使用2'-O- 甲基轉(zhuǎn)移酶將Cap0 轉(zhuǎn)化為Cap1。酶法加帽引入的帽結(jié)構(gòu)與真核生物體內(nèi)自然帽結(jié)構(gòu)一致，從根本上降低外源mRNA 免疫原性的同時(shí)，保護(hù)其不被降解，并提高翻譯效率，增加細(xì)胞內(nèi)蛋白產(chǎn)量。通過酶法加帽可獲得完整的加帽效率，而通過化學(xué)合成帽類似物結(jié)構(gòu)加帽，其加帽效率相對較低，并且帽類似物結(jié)構(gòu)與自然帽結(jié)構(gòu)有差異。

mRNA Cap 2′-O-Methyltransferas 可利用 S-腺苷甲硫氨酸（SAM）作為甲基供體， 在 RNA 5′末端緊鄰帽結(jié)構(gòu)（Cap 0）的鄰近的核苷酸的 2′-O 上添加甲基基團(tuán)，形成帶有 Cap 1 結(jié)構(gòu)的 mRNA。Cap1 結(jié)構(gòu)能增強(qiáng) mRNA 的翻譯效率，從而可提高轉(zhuǎn)染后 mRNA 編碼的蛋白表達(dá)水平。該酶只能以帶 7-甲基鳥苷帽結(jié)構(gòu)（m7GpppN）的 RNA 為底物，不會(huì)作用于 5′末端為pN、ppN、 pppN 或 GpppN 的 RNA。帶 7-甲基鳥苷帽結(jié)構(gòu)（m7GpppN）的 RNA 可通過 Vaccinia Capping System來制備。 

Cap0 結(jié)構(gòu)的 mRNA 2′-O 甲基化（Cap1），以提高 mRNA 的翻譯和表達(dá)效率。