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糖鏈抗原19-9(CA19-9)-磁微粒化學(xué)發(fā)光（吖啶酯）解決方案

  專(zhuān)題推薦     |      2023-09-14
HP免疫層析
1.項(xiàng)目背景
糖鏈抗原(carbohydrate antigen 19-9，CA19-9)是一種粘蛋白型的糖類(lèi)蛋白腫瘤標(biāo)志物，為細(xì)胞膜上的糖脂質(zhì)，因由鼠單克隆抗體116NS19-9識(shí)別而命名。是迄今報(bào)道的對(duì)胰腺癌敏感性較高的標(biāo)志物。在血清中它以唾液粘蛋白形式存在，分布于正常胎兒胰腺、膽囊、肝、腸和正常成年人胰腺、膽管上皮等處。是存在于血液循環(huán)的胃腸道腫瘤相關(guān)抗原。
《中國(guó)胰腺癌診治指南（2021）》指出：血清 CA19-9 是目前較常用的胰腺癌診斷標(biāo)記物，其診斷胰腺癌的敏感度為79%～81%，特異度為82%～90%。由于CA19-9 在膽道梗阻及感染狀態(tài)下亦可異常升高，故應(yīng)在黃疸緩解、炎癥控制后再對(duì)其進(jìn)行基線(xiàn)檢測(cè)。血清CA19-9水平可在一定程度上反映腫瘤負(fù)荷或提示有微轉(zhuǎn)移灶的可能。除診斷意義外，CA19-9還有助于評(píng)估預(yù)后及療效。胰腺癌病人術(shù)后血清CA19-9 水平升高雖可提示復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，但仍應(yīng)結(jié)合影像學(xué)證據(jù)等進(jìn)行綜合判斷。約10%的胰腺癌病人為L(zhǎng)ewis抗原陰性血型結(jié)構(gòu)，此類(lèi)病人不表達(dá)CA19-9，須結(jié)合其他腫瘤標(biāo)記物協(xié)助診斷。癌胚抗原診斷胰腺癌的特異度與 CA19-9 類(lèi)似，但敏感度僅為44.2%。CA125升高與胰腺癌術(shù)后早期遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)，一定程度上反映出腫瘤轉(zhuǎn)移潛能及其相關(guān)負(fù)荷，特別對(duì)CA19-9表達(dá)陰性的胰腺癌病人，CA125具有一定的預(yù)后評(píng)估價(jià)值。其他臨床常用的腫瘤標(biāo)記物還有 CA50、CA242、CA724等，聯(lián)合應(yīng)用有助于提高診斷敏感度和特異度，但仍需高級(jí)別證據(jù)支持。
2. 性能表現(xiàn)（化學(xué)發(fā)光（吖啶酯）平臺(tái)）
2.1 抗體配對(duì)組合：
糖鏈抗原CA19-9（貨號(hào)：EKY0018N）包被羧基磁珠+糖鏈抗原CA19-9（貨號(hào)：EKY0018O）標(biāo)記吖啶酯；
2.2 具體指標(biāo)
參考《YY/T 1178-2010 糖鏈抗原CA19-9定量測(cè)定試劑（盒）（化學(xué)發(fā)光免疫分析法）》
a. 最低檢出限：不高于2.0U/mL。
用零濃度校準(zhǔn)品或樣本稀釋液作為樣本進(jìn)行檢測(cè)，重復(fù)測(cè)定20次，得出20次測(cè)量結(jié)果的RLU值(相對(duì)發(fā)光值)，計(jì)算其平均值(M)和標(biāo)準(zhǔn)差(sD)，得出M+2SD，根據(jù)零濃度校準(zhǔn)品和相鄰校準(zhǔn)品之間的濃度一RLU值結(jié)果進(jìn)行兩點(diǎn)回歸擬合得出一次方程，將M+2SD的RLU值帶入上述方程中，求出對(duì)應(yīng)的濃度值，即為最低檢測(cè)限。
CA19-9 最低檢出限
空白樣本（n=20）
發(fā)光值
1
2607
2
2316
3
2371
4
2353
5
2414
6
2468
7
2299
8
2670
9
2189
10
2556
11
2221
12
2358
13
2429
14
2290
15
2304
16
2374
17
2317
18
2384
19
2285
20
2267
Mean
2374
SD
123.6
M+2SD
2621
10.6 U/mL
1
32734
2
31390
3
30977
Mean
31700
最低檢出限 U/mL
0.07
b. 重復(fù)性：分別為2.9%及2.8%。
用 40U/mL±8U/mL和 150U/mL±30U/mL的樣本各重復(fù)檢測(cè)10次，計(jì)算10次測(cè)量結(jié)果的平均值M和標(biāo)準(zhǔn)差SD，根據(jù)公式CV=SD/M*100％得出變異系數(shù)CV。其變異系數(shù)(CV)應(yīng)不大于10％(儀器自動(dòng)操作法)或不大于15％(手工操作法)。
CA19-9 重復(fù)性
序號(hào)
發(fā)光值
濃度值U/mL
發(fā)光值
濃度值U/mL
1
112817
40.73
490445
174.91
2
112570
40.64
488938
174.38
3
105906
38.24
497560
177.43
4
111795
40.36
478194
170.57
5
110967
40.06
472592
168.59
6
109292
39.46
488909
174.37
7
104306
37.66
469210
167.39
8
109133
39.40
477034
170.16
9
105000
37.91
451853
161.25
10
110520
39.90
491164
175.17
M
109230.6
39.44
480589.9
171.42
SD
3135.5
1.1
13636.1
4.8
CV
2.9%
2.9%
2.8%
2.8%
c. 線(xiàn)性范圍：1 U/mL-1000 U/mL。
將接近線(xiàn)性范圍上限的高值樣本按一定比例稀釋為至少5種濃度，其中低值濃度的樣本須接近線(xiàn)性范圍的下限。按試劑(盒)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，每一濃度重復(fù)檢測(cè)2次，計(jì)算平均值，將結(jié)果平均值和稀釋比例用二乘法進(jìn)行直線(xiàn)擬合，并計(jì)算線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)r。
線(xiàn)性范圍上限不應(yīng)低于參考值的5倍，下限應(yīng)低于參考值的1/5（參考羅氏CA19-9參考值為27 U/mL (第95百分位數(shù))、34 U/mL (第97.5百分位數(shù))、39 U/mL (第99百分位數(shù))）。在生產(chǎn)企業(yè)所規(guī)定的線(xiàn)性范圍內(nèi)，試劑(盒)的相關(guān)系數(shù)r應(yīng)≥0.99。
CA19-9 線(xiàn)性
線(xiàn)性
實(shí)測(cè)值均值U/mL
理論值U/mL
線(xiàn)性1
1.60
0.91
線(xiàn)性2
4.95
3.64
線(xiàn)性3
19.28
14.57
線(xiàn)性4
73.82
58.29
線(xiàn)性5
264.28
233.17
線(xiàn)性6
932.67
932.67
線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)r
0.9994
d. 回收率：98.3%。
將濃度約為200U/mL(允許偏差為±20％)的糖鏈抗原CA19-9樣品(A)加入血清或其他相應(yīng)的基質(zhì)樣品B中，所加入A的體積宜不超過(guò)總體積（A+B）的10%。
回收率應(yīng)在(85％～115%)范圍內(nèi)。
序號(hào)
混合樣本U/mL
低值樣本U/mL
高值樣本U/mL
1
37.58
23.04
174.91
2
37.04
22.11
174.38
3
37.87
22.33
177.43
均值
37.50
22.49
175.57
回收率
98.3%
3.臨床相關(guān)性（化學(xué)發(fā)光（吖啶酯）平臺(tái)）
西寶生物發(fā)光平臺(tái)CA19-9抗體配對(duì)與Roche CA19-9試劑賦值的臨床樣本（高值部分）相關(guān)性R2>0.95，相關(guān)性良好；低值部分（≤100 U/mL）相關(guān)性R2>0.95，相關(guān)性同樣較好。
4.測(cè)試方案
特別注明：
1）若客戶(hù)采用吖啶酯體系，建議CA19-9抗體與吖啶酯的標(biāo)記摩爾比在1:4左右；
2）若客戶(hù)采用堿性磷酸酶或辣根過(guò)氧化物酶體系，建議優(yōu)化酶與抗體標(biāo)記的摩爾比例。
待測(cè)樣本:加樣量20ul；
試劑1：糖鏈抗原CA19-9（貨號(hào)：EKY0018N）-磁珠稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑2：糖鏈抗原CA19-9（貨號(hào)：EKY0018O）-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
反應(yīng)條件：
第一步：20ul樣本+50ul試劑1混合，37℃孵育9min，清洗；
第二步：加入50ul試劑2混合，37℃孵育9min，清洗；
第三步：加入預(yù)激發(fā)液及激發(fā)液，進(jìn)行測(cè)試。
測(cè)試使用發(fā)光儀器:科斯邁SMART 500S；可適用于各類(lèi)吖啶酯體系的化學(xué)發(fā)光儀器（如四川邁克、深圳亞輝龍、山東康華生物、基蛋生物、南京諾爾曼等）
5.產(chǎn)品信息(可提供大包裝試劑)
產(chǎn)品名稱(chēng)
貨號(hào)
推薦配對(duì)
糖鏈抗原CA19-9單克隆抗體
EKY0018N
糖鏈抗原CA19-9（貨號(hào)：EKY0018N）包被羧基磁珠+糖鏈抗原CA19-9（貨號(hào)：EKY0018O）標(biāo)記吖啶酯（抗體配對(duì)組合）
糖鏈抗原CA19-9單克隆抗體
EKY0018O
糖鏈抗原CA19-9抗體（貨號(hào)：eky 0018N）-羧基磁珠濃縮液
DKY1318A
糖鏈抗原CA19-9抗體（貨號(hào)：EKY0018O）-吖啶酯濃縮液
DKY1318B
羧基磁珠(超順磁)，1um
DEG0091B-1-100mg
羧基磁珠(超順磁)，3um
DEG0091A-3-100mg

 

HP免疫層析
1.項(xiàng)目背景
糖鏈抗原(carbohydrate antigen 19-9，CA19-9)是一種粘蛋白型的糖類(lèi)蛋白腫瘤標(biāo)志物，為細(xì)胞膜上的糖脂質(zhì)，因由鼠單克隆抗體116NS19-9識(shí)別而命名。是迄今報(bào)道的對(duì)胰腺癌敏感性較高的標(biāo)志物。在血清中它以唾液粘蛋白形式存在，分布于正常胎兒胰腺、膽囊、肝、腸和正常成年人胰腺、膽管上皮等處。是存在于血液循環(huán)的胃腸道腫瘤相關(guān)抗原。
《中國(guó)胰腺癌診治指南（2021）》指出：血清 CA19-9 是目前較常用的胰腺癌診斷標(biāo)記物，其診斷胰腺癌的敏感度為79%～81%，特異度為82%～90%。由于CA19-9 在膽道梗阻及感染狀態(tài)下亦可異常升高，故應(yīng)在黃疸緩解、炎癥控制后再對(duì)其進(jìn)行基線(xiàn)檢測(cè)。血清CA19-9水平可在一定程度上反映腫瘤負(fù)荷或提示有微轉(zhuǎn)移灶的可能。除診斷意義外，CA19-9還有助于評(píng)估預(yù)后及療效。胰腺癌病人術(shù)后血清CA19-9 水平升高雖可提示復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，但仍應(yīng)結(jié)合影像學(xué)證據(jù)等進(jìn)行綜合判斷。約10%的胰腺癌病人為L(zhǎng)ewis抗原陰性血型結(jié)構(gòu)，此類(lèi)病人不表達(dá)CA19-9，須結(jié)合其他腫瘤標(biāo)記物協(xié)助診斷。癌胚抗原診斷胰腺癌的特異度與 CA19-9 類(lèi)似，但敏感度僅為44.2%。CA125升高與胰腺癌術(shù)后早期遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)，一定程度上反映出腫瘤轉(zhuǎn)移潛能及其相關(guān)負(fù)荷，特別對(duì)CA19-9表達(dá)陰性的胰腺癌病人，CA125具有一定的預(yù)后評(píng)估價(jià)值。其他臨床常用的腫瘤標(biāo)記物還有 CA50、CA242、CA724等，聯(lián)合應(yīng)用有助于提高診斷敏感度和特異度，但仍需高級(jí)別證據(jù)支持。
2. 性能表現(xiàn)（化學(xué)發(fā)光（吖啶酯）平臺(tái)）
2.1 抗體配對(duì)組合：
糖鏈抗原CA19-9（貨號(hào)：EKY0018N）包被羧基磁珠+糖鏈抗原CA19-9（貨號(hào)：EKY0018O）標(biāo)記吖啶酯；
2.2 具體指標(biāo)
參考《YY/T 1178-2010 糖鏈抗原CA19-9定量測(cè)定試劑（盒）（化學(xué)發(fā)光免疫分析法）》
a. 最低檢出限：不高于2.0U/mL。
用零濃度校準(zhǔn)品或樣本稀釋液作為樣本進(jìn)行檢測(cè)，重復(fù)測(cè)定20次，得出20次測(cè)量結(jié)果的RLU值(相對(duì)發(fā)光值)，計(jì)算其平均值(M)和標(biāo)準(zhǔn)差(sD)，得出M+2SD，根據(jù)零濃度校準(zhǔn)品和相鄰校準(zhǔn)品之間的濃度一RLU值結(jié)果進(jìn)行兩點(diǎn)回歸擬合得出一次方程，將M+2SD的RLU值帶入上述方程中，求出對(duì)應(yīng)的濃度值，即為最低檢測(cè)限。
CA19-9 最低檢出限
空白樣本（n=20）
發(fā)光值
1
2607
2
2316
3
2371
4
2353
5
2414
6
2468
7
2299
8
2670
9
2189
10
2556
11
2221
12
2358
13
2429
14
2290
15
2304
16
2374
17
2317
18
2384
19
2285
20
2267
Mean
2374
SD
123.6
M+2SD
2621
10.6 U/mL
1
32734
2
31390
3
30977
Mean
31700
最低檢出限 U/mL
0.07
b. 重復(fù)性：分別為2.9%及2.8%。
用 40U/mL±8U/mL和 150U/mL±;30U/mL的樣本各重復(fù)檢測(cè)10次，計(jì)算10次測(cè)量結(jié)果的平均值M和標(biāo)準(zhǔn)差SD，根據(jù)公式CV=SD/M*100％得出變異系數(shù)CV。其變異系數(shù)(CV)應(yīng)不大于10％(儀器自動(dòng)操作法)或不大于15％(手工操作法)。
CA19-9 重復(fù)性
序號(hào)
發(fā)光值
濃度值U/mL
發(fā)光值
濃度值U/mL
1
112817
40.73
490445
174.91
2
112570
40.64
488938
174.38
3
105906
38.24
497560
177.43
4
111795
40.36
478194
170.57
5
110967
40.06
472592
168.59
6
109292
39.46
488909
174.37
7
104306
37.66
469210
167.39
8
109133
39.40
477034
170.16
9
105000
37.91
451853
161.25
10
110520
39.90
491164
175.17
M
109230.6
39.44
480589.9
171.42
SD
3135.5
1.1
13636.1
4.8
CV
2.9%
2.9%
2.8%
2.8%
c. 線(xiàn)性范圍：1 U/mL-1000 U/mL。
將接近線(xiàn)性范圍上限的高值樣本按一定比例稀釋為至少5種濃度，其中低值濃度的樣本須接近線(xiàn)性范圍的下限。按試劑(盒)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，每一濃度重復(fù)檢測(cè)2次，計(jì)算平均值，將結(jié)果平均值和稀釋比例用二乘法進(jìn)行直線(xiàn)擬合，并計(jì)算線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)r。
線(xiàn)性范圍上限不應(yīng)低于參考值的5倍，下限應(yīng)低于參考值的1/5（參考羅氏CA19-9參考值為27 U/mL (第95百分位數(shù))、34 U/mL (第97.5百分位數(shù))、39 U/mL (第99百分位數(shù))）。在生產(chǎn)企業(yè)所規(guī)定的線(xiàn)性范圍內(nèi)，試劑(盒)的相關(guān)系數(shù)r應(yīng)≥0.99。
CA19-9 線(xiàn)性
線(xiàn)性
實(shí)測(cè)值均值U/mL
理論值U/mL
線(xiàn)性1
1.60
0.91
線(xiàn)性2
4.95
3.64
線(xiàn)性3
19.28
14.57
線(xiàn)性4
73.82
58.29
線(xiàn)性5
264.28
233.17
線(xiàn)性6
932.67
932.67
線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)r
0.9994
d. 回收率：98.3%。
將濃度約為200U/mL(允許偏差為±20％)的糖鏈抗原CA19-9樣品(A)加入血清或其他相應(yīng)的基質(zhì)樣品B中，所加入A的體積宜不超過(guò)總體積（A+B）的10%。
回收率應(yīng)在(85％～115%)范圍內(nèi)。
序號(hào)
混合樣本U/mL
低值樣本U/mL
高值樣本U/mL
1
37.58
23.04
174.91
2
37.04
22.11
174.38
3
37.87
22.33
177.43
均值
37.50
22.49
175.57
回收率
98.3%
3.臨床相關(guān)性（化學(xué)發(fā)光（吖啶酯）平臺(tái)）
西寶生物發(fā)光平臺(tái)CA19-9抗體配對(duì)與Roche CA19-9試劑賦值的臨床樣本（高值部分）相關(guān)性R2>0.95，相關(guān)性良好；低值部分（≤100 U/mL）相關(guān)性R2>0.95，相關(guān)性同樣較好。
4.測(cè)試方案
特別注明：
1）若客戶(hù)采用吖啶酯體系，建議CA19-9抗體與吖啶酯的標(biāo)記摩爾比在1:4左右；
2）若客戶(hù)采用堿性磷酸酶或辣根過(guò)氧化物酶體系，建議優(yōu)化酶與抗體標(biāo)記的摩爾比例。
待測(cè)樣本:加樣量20ul；
試劑1：糖鏈抗原CA19-9（貨號(hào)：EKY0018N）-磁珠稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑2：糖鏈抗原CA19-9（貨號(hào)：EKY0018O）-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
反應(yīng)條件：
第一步：20ul樣本+50ul試劑1混合，37℃孵育9min，清洗；
第二步：加入50ul試劑2混合，37℃孵育9min，清洗；
第三步：加入預(yù)激發(fā)液及激發(fā)液，進(jìn)行測(cè)試。
測(cè)試使用發(fā)光儀器:科斯邁SMART 500S；可適用于各類(lèi)吖啶酯體系的化學(xué)發(fā)光儀器（如四川邁克、深圳亞輝龍、山東康華生物、基蛋生物、南京諾爾曼等）
5.產(chǎn)品信息(可提供大包裝試劑)
產(chǎn)品名稱(chēng)
貨號(hào)
推薦配對(duì)
糖鏈抗原CA19-9單克隆抗體
EKY0018N
糖鏈抗原CA19-9（貨號(hào)：EKY0018N）包被羧基磁珠+糖鏈抗原CA19-9（貨號(hào)：EKY0018O）標(biāo)記吖啶酯（抗體配對(duì)組合）
糖鏈抗原CA19-9單克隆抗體
EKY0018O
糖鏈抗原CA19-9抗體（貨號(hào)：eky 0018N）-羧基磁珠濃縮液
DKY1318A
糖鏈抗原CA19-9抗體（貨號(hào)：EKY0018O）-吖啶酯濃縮液
DKY1318B
羧基磁珠(超順磁)，1um
DEG0091B-1-100mg
羧基磁珠(超順磁)，3um
DEG0091A-3-100mg