1.項(xiàng)目背景
摘自《中國胃癌篩查與早診早治指南（2022）》
PG是胃蛋白酶的無活性前體，可分為PGI和PGII種亞型。PGI主要由胃體和胃底腺的主細(xì)胞和頸黏液細(xì)胞分泌，而 PGII除由胃底腺分泌外，胃竇幽門腺和近端十二指腸 Brunner腺亦可分泌。當(dāng)胃黏膜發(fā)生萎縮時(shí)，血清PGI水平和（或）PGI/II比值（PGR）降低。血清中約存在人體1%的PG，其血清水平可作為胃黏膜形態(tài)和功能狀態(tài)的標(biāo)志，聯(lián)合Hp檢測(cè)可識(shí)別出胃癌的高危個(gè)體。一項(xiàng)納入27項(xiàng)人群篩查研究和15項(xiàng)針對(duì)特定高危人群（如萎縮性胃炎）研究、涉及約30萬例受試者的Meta分析結(jié)果顯示，在一般人群研究中血清PG（PGI≤70ng/ml，PGR≤3）檢測(cè)診斷胃癌的靈敏度和特異度分別為77%和73%，在特定高危人群中靈敏度和特異度分別為57%和80%。 另有3項(xiàng) Meta分析評(píng)估了PG檢測(cè)對(duì)胃癌診斷的靈敏度和特異度，結(jié)果顯示，血清PG檢測(cè)對(duì)胃癌診斷的靈敏度和特異度分別為57%～69%和 73%～85%。
2.性能表現(xiàn)
針對(duì)PGII的檢測(cè)，西寶生物推出4種單克隆抗體和1種重組抗原適合化學(xué)發(fā)光（AE/AP）和熒光層析平臺(tái)。具體性能如下
（以下評(píng)估僅代表在西寶生物的工藝體系下的驗(yàn)證，建議客戶根據(jù)自身工藝進(jìn)行抗體交叉配對(duì)驗(yàn)證）。
2.1化學(xué)發(fā)光（AE）平臺(tái)：
組合1（兩試劑模式）：
胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0290D）包被羧基磁珠+胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0289D）標(biāo)記吖啶酯；
組合2（三試劑模式）：
胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0290D）標(biāo)記生物素+胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0289D）標(biāo)記吖啶酯+鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號(hào)：DEG0814A）；
組合3（三試劑模式）：
胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0289D）標(biāo)記生物素+胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0290D）標(biāo)記吖啶酯+鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號(hào)：DEG0814A）；
線性范圍：0.5ng/mL-100ng/mL；最低檢出限：0.5ng/mL。
濃度值在1000ng/mL以內(nèi)沒有發(fā)現(xiàn)高劑量鉤狀效應(yīng)(HOOK效應(yīng))。
2.2化學(xué)發(fā)光（AP）平臺(tái)：
組合4（兩試劑模式）：
胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0289E）包被羧基磁珠+胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0290E）標(biāo)記堿性磷酸酶；
組合5（三試劑模式）：
胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0289E）標(biāo)記生物素+胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0290E）標(biāo)記堿性磷酸酶+鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號(hào)：DEG0814A）。
線性范圍：0.5ng/mL-100ng/mL；最低檢出限：0.5ng/mL。
濃度值在1000ng/mL以內(nèi)沒有發(fā)現(xiàn)高劑量鉤狀效應(yīng)(HOOK效應(yīng))。
2.3熒光免疫層析平臺(tái)：
組合6：
胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0289E）標(biāo)記熒光微球+胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0290E）劃膜；
線性范圍：0.5ng/mL-100ng/mL；最低檢出限：0.5ng/mL。
濃度值在1000ng/mL以內(nèi)沒有發(fā)現(xiàn)高劑量鉤狀效應(yīng)(HOOK效應(yīng))。
2.4 穩(wěn)定性評(píng)估
2.4.1 堿性磷酸酶標(biāo)記抗體穩(wěn)定性
A）胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0290E）標(biāo)記堿性磷酸酶濃縮液采用AP酶標(biāo)記物稀釋液（貨號(hào)：DCD0519A）稀釋到合適濃度后，進(jìn)行37℃熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。如表1所示，PGII ALP酶工作液37℃儲(chǔ)存熱加速3天與2℃-8℃儲(chǔ)存3天發(fā)光值平均降幅超過30%以上，表明PGII ALP酶工作液熱穩(wěn)定性差。
表1 PGII ALP酶工作液熱穩(wěn)定性3天數(shù)據(jù)（不含保護(hù)劑）
序號(hào) | PGII質(zhì)控品濃度ng/mL | PGII ALP酶工作液37℃儲(chǔ)存熱加速3天與2℃-8℃儲(chǔ)存3天發(fā)光值均值差異 |
Q1 | 5 | -31.0% |
Q2 | 12.5 | -35.5% |
Q3 | 50 | -33.6% |
平均變化
| -33.4%
| |
B）在AP酶標(biāo)記物稀釋液（貨號(hào)：DCD0519A）中添加20%左右的蛋白保護(hù)劑GH（貨號(hào)：DCL0009A）配成新的AP酶稀釋液，繼續(xù)進(jìn)行胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0290E）標(biāo)記堿性磷酸酶的37℃熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。如表2所示，PGII ALP酶工作液37℃儲(chǔ)存熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值平均降幅在10%左右，表明PGII ALP酶工作液熱穩(wěn)定性良好。本實(shí)驗(yàn)表明蛋白保護(hù)劑GH（貨號(hào)：DCL0009A）對(duì)PGII ALP酶工作液的穩(wěn)定性有很大幫助。
表2 PGII ALP酶工作液熱穩(wěn)定性7天數(shù)據(jù)（含保護(hù)劑）
序號(hào) | PGII質(zhì)控品濃度ng/mL | PGII ALP酶工作液37℃儲(chǔ)存熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值均值差異 |
Q1 | 5 | -8.1% |
Q2 | 12.5 | -10.5% |
Q3 | 50 | -9.9% |
平均變化
| -9.5%
| |
2.4.2 PGII抗原穩(wěn)定性
A）采用PGII抗原稀釋液（貨號(hào)：DCD0521A）將PGII抗原（貨號(hào)：EKY0732B）稀釋成3個(gè)梯度（液體型），進(jìn)行37℃熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。如表3所示，PGII抗原稀釋梯度（液體型）37℃熱加速3天與2℃-8℃儲(chǔ)存3天發(fā)光值平均降幅超過80%以上，表明PGII抗原稀釋梯度（液體型）熱穩(wěn)定性非常差。
表3 PGII抗原稀釋梯度（液體型）熱穩(wěn)定性3天數(shù)據(jù)
序號(hào) | PGII 質(zhì)控品濃度ng/mL | PGII 抗原稀釋梯度（液體型）37℃熱加速3天與2℃-8℃儲(chǔ)存3天發(fā)光值均值差異 |
Q1 | 5 | -85.0% |
Q2 | 12.5 | -85.1% |
Q3 | 50 | -87.1% |
平均變化
| -85.7%
| |
B）采用PGII抗原稀釋液（貨號(hào)：DCD0521A）將PGII抗原（貨號(hào)：EKY0732B）稀釋成3個(gè)梯度做凍干（凍干型），進(jìn)行37℃熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。如表4所示，PGII抗原稀釋梯度（凍干型）37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值平均降幅在5%左右，表明PGII抗原稀釋梯度（凍干型）熱穩(wěn)定性良好。
表4 PGII抗原稀釋梯度（凍干型）熱穩(wěn)定性7天數(shù)據(jù)
序號(hào) | PGII 質(zhì)控品濃度ng/mL | PGII 抗原稀釋梯度（凍干型）37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值均值差異 |
Q1 | 5 | -3.9% |
Q2 | 12.5 | -3.7% |
Q3 | 50 | -2.9% |
平均變化
| -3.5%
| |
3.臨床相關(guān)性
3.1化學(xué)發(fā)光（AE）平臺(tái)：
西寶生物發(fā)光（AE）平臺(tái)PGII抗體配對(duì)組合1（兩試劑模式）與邁瑞醫(yī)療PGII試劑（化學(xué)發(fā)光法）賦值的臨床樣本相關(guān)性R2>0.95，相關(guān)性良好；
西寶生物發(fā)光（AE）平臺(tái)PGII抗體配對(duì)組合2（三試劑模式）與邁瑞醫(yī)療PGII試劑（化學(xué)發(fā)光法）賦值的臨床樣本相關(guān)性R2>0.95，相關(guān)性良好。
西寶生物發(fā)光（AE）平臺(tái)PGII抗體配對(duì)組合3（三試劑模式）與邁瑞醫(yī)療PGII試劑（化學(xué)發(fā)光法）賦值的臨床樣本相關(guān)性R2>0.95，相關(guān)性良好。
3.2化學(xué)發(fā)光（AP）平臺(tái)：
西寶生物發(fā)光（AP）平臺(tái)PGII抗體配對(duì)組合4（兩試劑模式）與邁瑞醫(yī)療PGII試劑（化學(xué)發(fā)光法）賦值的臨床樣本相關(guān)性R2>0.95，相關(guān)性良好；
西寶生物發(fā)光（AP）平臺(tái)PGII抗體配對(duì)組合5（三試劑模式）與邁瑞醫(yī)療PGII試劑（化學(xué)發(fā)光法）賦值的臨床樣本相關(guān)性R2>0.95，相關(guān)性良好。
3.3熒光免疫層析平臺(tái)：
西寶生物熒光平臺(tái)PGII抗體配對(duì)組合6與邁瑞醫(yī)療PGII試劑（化學(xué)發(fā)光法）賦值的臨床樣本相關(guān)性（≤20ng/mL）R2在0.90左右，相關(guān)性較好；（＜100ng/mL）R2>0.95，相關(guān)性良好。
4. 測(cè)試方案
4.1化學(xué)發(fā)光（AE）平臺(tái)
4.1.1抗體配對(duì)組合1（兩試劑模式）：
待測(cè)抗原:PGII抗原（貨號(hào)：EKY0732B）
樣本/校準(zhǔn)品:樣品加樣量20ul；
試劑1：胃蛋白酶原II(PGI)抗體（貨號(hào)：EKN0290D）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑2：胃蛋白酶原II(PGI)抗體（貨號(hào)：EKN0289D）標(biāo)記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
反應(yīng)條件：
第一步：20ul樣品+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；
第二步：加入預(yù)激發(fā)液及激發(fā)液，進(jìn)行測(cè)試。
4.1.2抗體配對(duì)組合2（三試劑模式）：
待測(cè)抗原:PGII抗原（貨號(hào)：EKY0732B）
樣本/校準(zhǔn)品:樣品加樣量20ul；
M試劑：鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號(hào)：DEG0814A）稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑1：胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0290D）標(biāo)記-生物素稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑2：胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0289D）標(biāo)記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
反應(yīng)條件：
第一步：20ul樣本+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育9min；
第二步：加入50ul M試劑混合，37℃孵育9min，清洗；
第三步：加入預(yù)激發(fā)液及激發(fā)液，進(jìn)行測(cè)試。
4.1.3抗體配對(duì)組合3（三試劑模式）：
待測(cè)抗原:PGII抗原（貨號(hào)：EKY0732B）
樣本/校準(zhǔn)品:樣品加樣量20ul；
M試劑：鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號(hào)：DEG0814A）稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑1：胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0289D）標(biāo)記-生物素稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑2：胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0290D）標(biāo)記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
反應(yīng)條件：
第一步：20ul樣本+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育9min；
第二步：加入50ul M試劑混合，37℃孵育9min，清洗；
第三步：加入預(yù)激發(fā)液及激發(fā)液，進(jìn)行測(cè)試。
測(cè)試使用發(fā)光儀器:科斯邁SMART 500S。
4.2化學(xué)發(fā)光（AP）平臺(tái)
4.2.1抗體配對(duì)組合4（兩試劑模式）：
待測(cè)抗原:PGII抗原（貨號(hào)：EKY0732B）
樣本/校準(zhǔn)品:樣品加樣量20ul；
試劑1：胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0289E）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑2：胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0290E）標(biāo)記-堿性磷酸酶稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
反應(yīng)條件：
第一步：20ul樣品+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；
第二步：加入底物，進(jìn)行測(cè)試。
4.2.2抗體配對(duì)組合5（三試劑模式）：
待測(cè)抗原:PGII抗原（貨號(hào)：EKY0732B）
樣本/校準(zhǔn)品:樣品加樣量20ul；
M試劑：鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號(hào)：DEG0814A）稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑1：胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0289E）標(biāo)記-生物素稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑2：胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0290E）標(biāo)記-堿性磷酸酶稀釋物，用量100ul/測(cè)試；
反應(yīng)條件：
第一步：20ul樣本+50ul試劑1+100ul試劑2混合，37℃孵育10min；
第二步：加入50ul M試劑混合，37℃孵育5min，清洗；
第三步：加入底物，進(jìn)行測(cè)試。
測(cè)試使用發(fā)光儀器:迎凱Shine i2900。
4.3熒光免疫層析平臺(tái)抗體配對(duì)組合5：
待測(cè)抗原:PGII抗原（貨號(hào)：EKY0732B）
反應(yīng)條件：
樣品+稀釋液混勻（本次按照1:5稀釋），上樣，反應(yīng)時(shí)間（10min-15min）；
測(cè)試使用熒光儀器:和邁FIC-S100。
5.產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱
| 貨號(hào)
| 推薦配對(duì)
|
AP酶標(biāo)記物稀釋液 | DCD0519A | / |
蛋白保護(hù)劑GH | DCL0009A | 推薦使用濃度20%左右 |
PGII抗原稀釋液 | DCD0521A | / |
胃蛋白酶原II（PGII）抗體 | EKN0290D | 胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0290D）包被羧基磁珠+胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0289D）標(biāo)記吖啶酯（發(fā)光配對(duì)組合1）
胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0290D）標(biāo)記生物素+胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0289D）標(biāo)記吖啶酯+鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號(hào)：DEG0814A）（發(fā)光配對(duì)組合2）
胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0289D）標(biāo)記生物素+胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0290D）標(biāo)記吖啶酯+鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號(hào)：DEG0814A）（發(fā)光配對(duì)組合3）
胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0289E）包被羧基磁珠+胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0290E）標(biāo)記堿性磷酸酶（發(fā)光配對(duì)組合4）
胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0289E）標(biāo)記生物素+胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0290E）標(biāo)記堿性磷酸酶+鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號(hào)：DEG0814A）（發(fā)光配對(duì)組合5）
胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0289E）標(biāo)記熒光微球+胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0290E）劃膜（熒光配對(duì)組合6）
|
胃蛋白酶原II（PGII）抗體 | EKN0289D | |
胃蛋白酶原II（PGII）抗體 | EKN0289E | |
胃蛋白酶原II（PGII）抗體 | EKN0290E | |
胃蛋白酶原（PGII）抗原 | EKY0732B | |
胃蛋白酶原II（PGII）抗體 （貨號(hào)：EKN0290D）包被羧基磁珠濃縮液 | DKY1334A | |
胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0290D）標(biāo)記生物素濃縮液 | DKY1334B | |
胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0290D）標(biāo)記吖啶酯濃縮液 | DKY1334C | |
胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0289D）標(biāo)記生物素濃縮液 | DKY1334D | |
胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0289D）吖啶酯濃縮液 | DKY1334E | |
胃蛋白酶原II（PGII）抗體 （貨號(hào)：EKN0289E）包被羧基磁珠濃縮液 | DKY1334F | |
胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0289E）標(biāo)記生物素濃縮液 | DKY1334G | |
胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0290E）標(biāo)記堿性磷酸酶濃縮液 | DKY1334H | |
胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0289E）標(biāo)記熒光微球濃縮液 | DKY1334I | |
AMPPD 發(fā)光底物液（即用型） | DCD0517A | |
AMPPD 發(fā)光底物液（即用型） | DCD0517B | |
羧基磁性微球，1.5um | DEG0800C | |
鏈霉親和素磁性微球，1.5um | DEG0814A-10ml | |
時(shí)間分辨熒光微球，羧基（200nm） | AEG0786B |
1.項(xiàng)目背景
摘自《中國胃癌篩查與早診早治指南（2022）》
PG是胃蛋白酶的無活性前體，可分為PGI和PGII種亞型。PGI主要由胃體和胃底腺的主細(xì)胞和頸黏液細(xì)胞分泌，而 PGII除由胃底腺分泌外，胃竇幽門腺和近端十二指腸 Brunner腺亦可分泌。當(dāng)胃黏膜發(fā)生萎縮時(shí)，血清PGI水平和（或）PGI/II比值（PGR）降低。血清中約存在人體1%的PG，其血清水平可作為胃黏膜形態(tài)和功能狀態(tài)的標(biāo)志，聯(lián)合Hp檢測(cè)可識(shí)別出胃癌的高危個(gè)體。一項(xiàng)納入27項(xiàng)人群篩查研究和15項(xiàng)針對(duì)特定高危人群（如萎縮性胃炎）研究、涉及約30萬例受試者的Meta分析結(jié)果顯示，在一般人群研究中血清PG（PGI≤70ng/ml，PGR≤3）檢測(cè)診斷胃癌的靈敏度和特異度分別為77%和73%，在特定高危人群中靈敏度和特異度分別為57%和80%。 另有3項(xiàng) Meta分析評(píng)估了PG檢測(cè)對(duì)胃癌診斷的靈敏度和特異度，結(jié)果顯示，血清PG檢測(cè)對(duì)胃癌診斷的靈敏度和特異度分別為57%～69%和 73%～85%。
2.性能表現(xiàn)
針對(duì)PGII的檢測(cè)，西寶生物推出4種單克隆抗體和1種重組抗原適合化學(xué)發(fā)光（AE/AP）和熒光層析平臺(tái)。具體性能如下
（以下評(píng)估僅代表在西寶生物的工藝體系下的驗(yàn)證，建議客戶根據(jù)自身工藝進(jìn)行抗體交叉配對(duì)驗(yàn)證）。
2.1化學(xué)發(fā)光（AE）平臺(tái)：
組合1（兩試劑模式）：
胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0290D）包被羧基磁珠+胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0289D）標(biāo)記吖啶酯；
組合2（三試劑模式）：
胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0290D）標(biāo)記生物素+胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0289D）標(biāo)記吖啶酯+鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號(hào)：DEG0814A）；
組合3（三試劑模式）：
胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0289D）標(biāo)記生物素+胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0290D）標(biāo)記吖啶酯+鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號(hào)：DEG0814A）；
線性范圍：0.5ng/mL-100ng/mL；最低檢出限：0.5ng/mL。
濃度值在1000ng/mL以內(nèi)沒有發(fā)現(xiàn)高劑量鉤狀效應(yīng)(HOOK效應(yīng))。
2.2化學(xué)發(fā)光（AP）平臺(tái)：
組合4（兩試劑模式）：
胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0289E）包被羧基磁珠+胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0290E）標(biāo)記堿性磷酸酶；
組合5（三試劑模式）：
胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0289E）標(biāo)記生物素+胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0290E）標(biāo)記堿性磷酸酶+鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號(hào)：DEG0814A）。
線性范圍：0.5ng/mL-100ng/mL；最低檢出限：0.5ng/mL。
濃度值在1000ng/mL以內(nèi)沒有發(fā)現(xiàn)高劑量鉤狀效應(yīng)(HOOK效應(yīng))。
2.3熒光免疫層析平臺(tái)：
組合6：
胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0289E）標(biāo)記熒光微球+胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0290E）劃膜；
線性范圍：0.5ng/mL-100ng/mL；最低檢出限：0.5ng/mL。
濃度值在1000ng/mL以內(nèi)沒有發(fā)現(xiàn)高劑量鉤狀效應(yīng)(HOOK效應(yīng))。
2.4 穩(wěn)定性評(píng)估
2.4.1 堿性磷酸酶標(biāo)記抗體穩(wěn)定性
A）胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0290E）標(biāo)記堿性磷酸酶濃縮液采用AP酶標(biāo)記物稀釋液（貨號(hào)：DCD0519A）稀釋到合適濃度后，進(jìn)行37℃熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。如表1所示，PGII ALP酶工作液37℃儲(chǔ)存熱加速3天與2℃-8℃儲(chǔ)存3天發(fā)光值平均降幅超過30%以上，表明PGII ALP酶工作液熱穩(wěn)定性差。
表1 PGII ALP酶工作液熱穩(wěn)定性3天數(shù)據(jù)（不含保護(hù)劑）
序號(hào) | PGII質(zhì)控品濃度ng/mL | PGII ALP酶工作液37℃儲(chǔ)存熱加速3天與2℃-8℃儲(chǔ)存3天發(fā)光值均值差異 |
Q1 | 5 | -31.0% |
Q2 | 12.5 | -35.5% |
Q3 | 50 | -33.6% |
平均變化
| -33.4%
| |
B）在AP酶標(biāo)記物稀釋液（貨號(hào)：DCD0519A）中添加20%左右的蛋白保護(hù)劑GH（貨號(hào)：DCL0009A）配成新的AP酶稀釋液，繼續(xù)進(jìn)行胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0290E）標(biāo)記堿性磷酸酶的37℃熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。如表2所示，PGII ALP酶工作液37℃儲(chǔ)存熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值平均降幅在10%左右，表明PGII ALP酶工作液熱穩(wěn)定性良好。本實(shí)驗(yàn)表明蛋白保護(hù)劑GH（貨號(hào)：DCL0009A）對(duì)PGII ALP酶工作液的穩(wěn)定性有很大幫助。
表2 PGII ALP酶工作液熱穩(wěn)定性7天數(shù)據(jù)（含保護(hù)劑）
序號(hào) | PGII質(zhì)控品濃度ng/mL | PGII ALP酶工作液37℃儲(chǔ)存熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值均值差異 |
Q1 | 5 | -8.1% |
Q2 | 12.5 | -10.5% |
Q3 | 50 | -9.9% |
平均變化
| -9.5%
| |
2.4.2 PGII抗原穩(wěn)定性
A）采用PGII抗原稀釋液（貨號(hào)：DCD0521A）將PGII抗原（貨號(hào)：EKY0732B）稀釋成3個(gè)梯度（液體型），進(jìn)行37℃熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。如表3所示，PGII抗原稀釋梯度（液體型）37℃熱加速3天與2℃-8℃儲(chǔ)存3天發(fā)光值平均降幅超過80%以上，表明PGII抗原稀釋梯度（液體型）熱穩(wěn)定性非常差。
表3 PGII抗原稀釋梯度（液體型）熱穩(wěn)定性3天數(shù)據(jù)
序號(hào) | PGII 質(zhì)控品濃度ng/mL | PGII 抗原稀釋梯度（液體型）37℃熱加速3天與2℃-8℃儲(chǔ)存3天發(fā)光值均值差異 |
Q1 | 5 | -85.0% |
Q2 | 12.5 | -85.1% |
Q3 | 50 | -87.1% |
平均變化
| -85.7%
| |
B）采用PGII抗原稀釋液（貨號(hào)：DCD0521A）將PGII抗原（貨號(hào)：EKY0732B）稀釋成3個(gè)梯度做凍干（凍干型），進(jìn)行37℃熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。如表4所示，PGII抗原稀釋梯度（凍干型）37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值平均降幅在5%左右，表明PGII抗原稀釋梯度（凍干型）熱穩(wěn)定性良好。
表4 PGII抗原稀釋梯度（凍干型）熱穩(wěn)定性7天數(shù)據(jù)
序號(hào) | PGII 質(zhì)控品濃度ng/mL | PGII 抗原稀釋梯度（凍干型）37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值均值差異 |
Q1 | 5 | -3.9% |
Q2 | 12.5 | -3.7% |
Q3 | 50 | -2.9% |
平均變化
| -3.5%
| |
3.臨床相關(guān)性
3.1化學(xué)發(fā)光（AE）平臺(tái)：
西寶生物發(fā)光（AE）平臺(tái)PGII抗體配對(duì)組合1（兩試劑模式）與邁瑞醫(yī)療PGII試劑（化學(xué)發(fā)光法）賦值的臨床樣本相關(guān)性R2>0.95，相關(guān)性良好；
西寶生物發(fā)光（AE）平臺(tái)PGII抗體配對(duì)組合2（三試劑模式）與邁瑞醫(yī)療PGII試劑（化學(xué)發(fā)光法）賦值的臨床樣本相關(guān)性R2>0.95，相關(guān)性良好。
西寶生物發(fā)光（AE）平臺(tái)PGII抗體配對(duì)組合3（三試劑模式）與邁瑞醫(yī)療PGII試劑（化學(xué)發(fā)光法）賦值的臨床樣本相關(guān)性R2>0.95，相關(guān)性良好。
3.2化學(xué)發(fā)光（AP）平臺(tái)：
西寶生物發(fā)光（AP）平臺(tái)PGII抗體配對(duì)組合4（兩試劑模式）與邁瑞醫(yī)療PGII試劑（化學(xué)發(fā)光法）賦值的臨床樣本相關(guān)性R2>0.95，相關(guān)性良好；
西寶生物發(fā)光（AP）平臺(tái)PGII抗體配對(duì)組合5（三試劑模式）與邁瑞醫(yī)療PGII試劑（化學(xué)發(fā)光法）賦值的臨床樣本相關(guān)性R2>0.95，相關(guān)性良好。
3.3熒光免疫層析平臺(tái)：
西寶生物熒光平臺(tái)PGII抗體配對(duì)組合6與邁瑞醫(yī)療PGII試劑（化學(xué)發(fā)光法）賦值的臨床樣本相關(guān)性（≤20ng/mL）R2在0.90左右，相關(guān)性較好；（＜100ng/mL）R2>0.95，相關(guān)性良好。
4. 測(cè)試方案
4.1化學(xué)發(fā)光（AE）平臺(tái)
4.1.1抗體配對(duì)組合1（兩試劑模式）：
待測(cè)抗原:PGII抗原（貨號(hào)：EKY0732B）
樣本/校準(zhǔn)品:樣品加樣量20ul；
試劑1：胃蛋白酶原II(PGI)抗體（貨號(hào)：EKN0290D）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑2：胃蛋白酶原II(PGI)抗體（貨號(hào)：EKN0289D）標(biāo)記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
反應(yīng)條件：
第一步：20ul樣品+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；
第二步：加入預(yù)激發(fā)液及激發(fā)液，進(jìn)行測(cè)試。
4.1.2抗體配對(duì)組合2（三試劑模式）：
待測(cè)抗原:PGII抗原（貨號(hào)：EKY0732B）
樣本/校準(zhǔn)品:樣品加樣量20ul；
M試劑：鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號(hào)：DEG0814A）稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑1：胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0290D）標(biāo)記-生物素稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑2：胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0289D）標(biāo)記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
反應(yīng)條件：
第一步：20ul樣本+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育9min；
第二步：加入50ul M試劑混合，37℃孵育9min，清洗；
第三步：加入預(yù)激發(fā)液及激發(fā)液，進(jìn)行測(cè)試。
4.1.3抗體配對(duì)組合3（三試劑模式）：
待測(cè)抗原:PGII抗原（貨號(hào)：EKY0732B）
樣本/校準(zhǔn)品:樣品加樣量20ul；
M試劑：鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號(hào)：DEG0814A）稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑1：胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0289D）標(biāo)記-生物素稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑2：胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0290D）標(biāo)記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
反應(yīng)條件：
第一步：20ul樣本+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育9min；
第二步：加入50ul M試劑混合，37℃孵育9min，清洗；
第三步：加入預(yù)激發(fā)液及激發(fā)液，進(jìn)行測(cè)試。
測(cè)試使用發(fā)光儀器:科斯邁SMART 500S。
4.2化學(xué)發(fā)光（AP）平臺(tái)
4.2.1抗體配對(duì)組合4（兩試劑模式）：
待測(cè)抗原:PGII抗原（貨號(hào)：EKY0732B）
樣本/校準(zhǔn)品:樣品加樣量20ul；
試劑1：胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0289E）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑2：胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0290E）標(biāo)記-堿性磷酸酶稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
反應(yīng)條件：
第一步：20ul樣品+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；
第二步：加入底物，進(jìn)行測(cè)試。
4.2.2抗體配對(duì)組合5（三試劑模式）：
待測(cè)抗原:PGII抗原（貨號(hào)：EKY0732B）
樣本/校準(zhǔn)品:樣品加樣量20ul；
M試劑：鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號(hào)：DEG0814A）稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑1：胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0289E）標(biāo)記-生物素稀釋物，用量50ul/測(cè)試；
試劑2：胃蛋白酶原II(PGII)抗體（貨號(hào)：EKN0290E）標(biāo)記-堿性磷酸酶稀釋物，用量100ul/測(cè)試；
反應(yīng)條件：
第一步：20ul樣本+50ul試劑1+100ul試劑2混合，37℃孵育10min；
第二步：加入50ul M試劑混合，37℃孵育5min，清洗；
第三步：加入底物，進(jìn)行測(cè)試。
測(cè)試使用發(fā)光儀器:迎凱Shine i2900。
4.3熒光免疫層析平臺(tái)抗體配對(duì)組合5：
待測(cè)抗原:PGII抗原（貨號(hào)：EKY0732B）
反應(yīng)條件：
樣品+稀釋液混勻（本次按照1:5稀釋），上樣，反應(yīng)時(shí)間（10min-15min）；
測(cè)試使用熒光儀器:和邁FIC-S100。
5.產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱
| 貨號(hào)
| 推薦配對(duì)
|
AP酶標(biāo)記物稀釋液 | DCD0519A | / |
蛋白保護(hù)劑GH | DCL0009A | 推薦使用濃度20%左右 |
PGII抗原稀釋液 | DCD0521A | / |
胃蛋白酶原II（PGII）抗體 | EKN0290D | 胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0290D）包被羧基磁珠+胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0289D）標(biāo)記吖啶酯（發(fā)光配對(duì)組合1）
胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0290D）標(biāo)記生物素+胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0289D）標(biāo)記吖啶酯+鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號(hào)：DEG0814A）（發(fā)光配對(duì)組合2）
胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0289D）標(biāo)記生物素+胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0290D）標(biāo)記吖啶酯+鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號(hào)：DEG0814A）（發(fā)光配對(duì)組合3）
胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0289E）包被羧基磁珠+胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0290E）標(biāo)記堿性磷酸酶（發(fā)光配對(duì)組合4）
胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0289E）標(biāo)記生物素+胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0290E）標(biāo)記堿性磷酸酶+鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號(hào)：DEG0814A）（發(fā)光配對(duì)組合5）
胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0289E）標(biāo)記熒光微球+胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0290E）劃膜（熒光配對(duì)組合6）
|
胃蛋白酶原II（PGII）抗體 | EKN0289D | |
胃蛋白酶原II（PGII）抗體 | EKN0289E | |
胃蛋白酶原II（PGII）抗體 | EKN0290E | |
胃蛋白酶原（PGII）抗原 | EKY0732B | |
胃蛋白酶原II（PGII）抗體 （貨號(hào)：EKN0290D）包被羧基磁珠濃縮液 | DKY1334A | |
胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0290D）標(biāo)記生物素濃縮液 | DKY1334B | |
胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0290D）標(biāo)記吖啶酯濃縮液 | DKY1334C | |
胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0289D）標(biāo)記生物素濃縮液 | DKY1334D | |
胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0289D）吖啶酯濃縮液 | DKY1334E | |
胃蛋白酶原II（PGII）抗體 （貨號(hào)：EKN0289E）包被羧基磁珠濃縮液 | DKY1334F | |
胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0289E）標(biāo)記生物素濃縮液 | DKY1334G | |
胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0290E）標(biāo)記堿性磷酸酶濃縮液 | DKY1334H | |
胃蛋白酶原II（PGII）抗體（貨號(hào)：EKN0289E）標(biāo)記熒光微球濃縮液 | DKY1334I | |
AMPPD 發(fā)光底物液（即用型） | DCD0517A | |
AMPPD 發(fā)光底物液（即用型） | DCD0517B | |
羧基磁性微球，1.5um | DEG0800C | |
鏈霉親和素磁性微球，1.5um | DEG0814A-10ml | |
時(shí)間分辨熒光微球，羧基（200nm） | AEG0786B |
